Victor Deroncele

μ- NOTA 23

By Víctor Deroncelé

La prueba del Rojo de Metilo forma parte de una batería de pruebas bioquímicas conocidas como IMViC, y sirve para   para determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar la glucosa con producción de ácido por la vía ácido mixta.

La prueba se realiza en el medio de cultivo líquido llamado rojo de metilo–Voges Proskauer, mejor conocido con las siglas RM/VP. Este medio está compuesto por polipeptona tamponada, glucosa, fosfato dipotásico y agua destilada.

La prueba del rojo de metilo (MR) detecta la producción de ácido durante la fermentación de la glucosa, de tal modo que el pH del cultivo alcance valores de aproximadamente 4,5, que se demuestra por un cambio en el color del indicador rojo de metilo que se añade al final del período de incubación.

Algunas bacterias tienen la capacidad de utilizar glucosa y convertirla en un ácido como ácido láctico, ácido acético o ácido fórmico como producto final. Estas bacterias inicialmente metabolizan la glucosa en ácido pirúvico, que se metaboliza aún más a través de la » vía ácido mixta para producir el ácido». El tipo de ácido producido difiere de una especie a otra y depende de las vías enzimáticas específicas presentes en las bacterias. El ácido así producido es el responsable de la disminución del pH (a 4,5 o menos), lo que se indica por un cambio en el color del rojo de metilo de amarillo a rojo.

En la prueba de rojo de metilo (prueba MR), las bacterias de prueba se cultivan en un caldo que contiene glucosa. Si la bacteria tiene la capacidad de utilizar glucosa con la producción de un ácido estable, el color del rojo de metilo cambia de amarillo a rojo cuando se agrega al caldo de cultivo.

Procedimiento

  1. Se inocula el MRVP con un cultivo puro del microorganismo y se incuba a 37ºC, durante 48 horas.
  2. Se adicionan 5-6 gotas del indicador rojo de metilo por cada 5 ml de caldo.
  3. Observar el cambio de color.

 

Resultado positivo: Formación de un color rojo.

Resultado negativo:  Formación de un color amarillo

 

Controles de la prueba:

  • Positivo: Escherichia coli (ATCC25922)
  • Negativo: Enterobacter aerogenes (ATCC13048). Klebsiella pneumoniae (ATCC 13883)

Ejemplos de microorganismos Rojo de metilo-positivos.

Escherichia coli

Shigella spp.

Salmonella spp.

Citrobacter spp.

Proteus spp.

Yersinia spp.

Ejemplos de microorganismos Rojo de metilo-negativos.

   Enterobacter spp.

  Hafnia spp.

 Serratia marcescens

Klebsiella pneumoniae

Referencias y lecturas adicionales:

  • Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. (2016). In Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. American Society of Microbiology. https://doi.org/10.1128/9781555818814
  • Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, Koneman, 5th edition