Victor Deroncele

μ- NOTA 24

By Víctor Deroncelé

La prueba de Voges Proskauer forma parte de una batería de pruebas bioquímicas conocidas como IMViC, y consiste en determinar la capacidad que tiene un microorganismo para producir acetilmetil carbinol (acetoína) como producto intermediario derivado del metabolismo de la glucosa (fermentación butanodiólica).

La prueba de Voges-Proskauer (VP) se utiliza para determinar si un organismo produce acetilmetilcarbinol a partir de la fermentación de glucosa. Si está presente, el acetilmetilcarbinol se convierte en diacetilo en presencia de -naftol, álcali fuerte (40% KOH) y oxígeno atmosférico. El diacetilo que forma un complejo de color rojizo con la α-naftol.

Reacción Voges Proskauer

Las peptonas presentes en el medio proporcionan los requerimientos nutricionales indispensables para el crecimiento bacteriano. La glucosa es el compuesto principal. Muchas bacterias tienen la capacidad de metabolizar la glucosa y formar ácido pirúvico. El piruvato es un intermediario del metabolismo de la glucosa y a partir de allí cada microorganismo puede tomar diferentes vías. Algunos formarán ácidos mixtos, tales como ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico y ácido succínico, y otros formaran productos neutros como el 2,3-butanediol.

Para evidenciar la reacción se debe realizar un revelado utilizando dos reactivos (reactivos de Barrit), conocidos como Voges A (una solución al 5% de α-naftol) y Voges B (un preparado de hidróxido de potasio al 40%). La α-naftol debe agregarse siempre primero, agitando el tubo para que el medio entre en contacto con el oxígeno. De esta manera la acetoína presente se oxida a diacetilo, y el 2,3-butanediol se oxida para formar acetoína, pasando  esta a diacetilo.

Para realizar el test de Voges-Proskauer se inocula un caldo RM/VP con el microorganismo en estudio, a partir de un cultivo puro de 18 a 24 horas. Se incuba a 35-37°C por 24 a 48 horas, aunque en ocasiones es necesario extender el periodo de incubación. Transcurrido el tiempo de incubación se separa una alícuota de 1 ml en un tubo y se realiza el revelado adicionando 12 gotas (0,6 ml) del reactivo Voges A y 4 gotas (0,2 ml) de Voges B. Se mezcla para airear y se deja reposar (5-10 minutos) antes de interpretar.

Resultado positivo: Formación de un color rojo.

Resultado negativo: Sin cambios.

 

Controles de la prueba:

  • Positivo: Klebsiella pneumoniae ATCC 13883—VP positivo (rojo)
  • Negativo: Escherichia coli ATCC 25922—VP negativo (sin cambios)

Referencias y lecturas adicionales:

  • Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. (2016). In Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. American Society of Microbiology. https://doi.org/10.1128/9781555818814
  • Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, Koneman, 5th edition