Victor Deroncele

μ- NOTA 16

By Víctor Deroncelé

La enzima fenilalanina deaminasa es la encargada de desdoblar la fenilalanina, el producto de la desaminación es el ácido fenilpirúvico, éste en presencia de cloruro férrico da lugar a un quelato de color verde.

El agar fenilalanina, también conocido como medio de fenilalanina desaminasa, contiene nutrientes y DL-fenilalanina. La fenilalanina sirve como sustrato para las enzimas, que pueden desaminarla para formar ácido fenilpirúvico. El extracto de levadura en el medio favorece el crecimiento de los organismos. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico.

NaCl……………………………5.0g/l
Extracto de levadura……………3.0g/l
Fenilalanina…………………….2.0g/l
K2HPO4…………………………1.0g/l
Agar…………………………….12.0g/l

Los microorganismos que producen fenilalanina desaminasa eliminan la amina (NH2) de la fenilalanina. La reacción da como resultado la producción de amoníaco (NH3) y ácido fenilpirúvico. El ácido fenilpirúvico se detecta añadiendo unas gotas de cloruro férrico al 10% que actúa como agente quelante; se forma un complejo de color verde entre estos dos compuestos que indica una prueba positiva. Si el medio permanece de color pajizo, el organismo es negativo para la producción de fenilalanina desaminasa.

Se recomienda su uso  para la diferenciación de bacilos entéricos gramnegativos en función de la capacidadde estos  para producir ácido fenilpirúvico por desaminación oxidativa. Los géneros Morganella, Proteus y Providencia pueden diferenciarse de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Procedimiento.

  • A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar un inóculo denso estriando la superficie del medio.
  • Incubar el cultivo aeróbicamente a 35ºC. durante 18-24 horas.
  • Luego de la incubación, aplicar 4-5 gotas de una solución de cloruro férrico al 10 %, directamente en el pico de flauta.
  • Agiter suavemente el tubo y observe el desarrollo de un color verde (1-5 min).
  • Reacción Positiva: el medio cambia a color verde.
  • Reacción Negativa: el medio permanece sin cambio.

Controles de la Prueba de la fenilalanina desaminasa